Actividad antiparasitaria multiple de alcaloides totales de corteza de Galipea Longiflora Krause Kallunki (Evanta)

Abstract

Se determino la actividad antiparasitaria in vitro de alcaloides totales de evanta (CAT) sobre: promastigotes y amastigotes axenicos de Leishmania, epimastigotes y tripomastigotes de Tripanosoma cruzi, trofozoitos de Acanthamoeba y Plasmodium falciparum. Para determinar la actividad leishmanicida in vitro de CAT se obtuvo poblaciones estables de amastigotes axenicos mediante la transformacion in vitro de promastigotes de cepas de Leishmania amazonensis MHOM/BR/77/LTB0016(LA), Leishmania amazonensis clon 1MHOM/BR/76/LBT-012 (Lma), y Leishmania spp (L.BTE- 002) en medio M199 (M0393-Sigma) a 320C, pH 5.7 y Suero Bovino Fetal (SBF) al 20 por ciento, a su vez se puso a punto un metodo colorimetrico basado en la reduccion de la sal de tetrazolium (XTT) a una forma soluble en agua, formazan, frente a las 2 formas parasitarias de Leishmania, promastigotes y amastigotes axenicos con fenasin metosulfato (PMS) y fenasin etosulfato (PES) como acopladores de electrones, con lecturas a 450nm de longitud de onda y entre 2 a 5 horas de incubacion. Bajo esas condiciones se pudo evidenciar que existe una buena correlacion entre el metodo de conteo de parasitos en camara de Neubauer y la medicion de absorbancias como producto de la reduccion del XTT frente a promastigotes (R2= 0.966 ) y amastigotes axenicos (R2 = 0.952). Mediante el metodo colorimetrico (XTT) se obtuvo la IC50 de CAT frente a 8 cepas de Leishmania (promastigotes), presentando valores entre 26.9.40.5ƒÊg/mL, y frente a amastigotes axenicos (Lma) 23.1 ƒÊg/mL (+/-)0.4. Por el metodo de conteo optico se determino la IC50 in vitro de CAT sobre epimastigotes de dos cepas de referencia (Tulahuen-Y) y 6 cepas nativas de Tripanosoma cruzi con valores de IC50 entre 5.8 - 21.5ƒÊg/mL. Frente a tripomastigotes en ensayo ex vivo se evidencio un IC50 de 122.7ƒÊg/mL (+/-) 23.3, sin presentar actividad en los ensayos in vivo a concentraciones entre 100 y 250mg/Kg de CAT. Se demostro la actividad in vitro de CAT sobre Plasmodium falciparum (cepa F32 sensible a cloroquina) mediante el metodo optico con IC50 de 20ƒÊg/mL. Por ultimo el presente trabajo muestra de forma cientifica el uso tradicional de corteza de evanta como amebicida debido a los resultados encontrados de CAT frente a dos cepas de Acanthamoeba castellani Neff con IC50 de 12ƒÊg/mL (+/-0,6) y Acanthamoeba polyfaga MN7 con IC50 27.3ƒÊg/mL (+/- 2.6) resultados interesantes en relacion a los a los rangos de inhibicion de la 6 polihexametilenbiguanida-PHMB y la clorhexidina, antisepticos topicos con capacidad antiprotozoaria, para el tratamiento de queratitis producidas por especies de Acanthamoeba.