Generación de masa celular y evaluación de la actividad metabólica en cultivos in vitro de Galipea longiflora.

Abstract

Dentro de la amplia biodiversidad de la Amazonía boliviana, se encuentra la especie vegetal Galipea longiflora k. predominantemente en los departamentos de La Paz y Beni, esta especie ha sido estudiada y caracterizada por su contenido de alcaloides quinolínicos los cuales presentan propiedades leishmanicidas in vitro e in vivo. A partir de explantes de hojas de plántulas, fueron obtenidos cultivos celulares en el medio Murashige y Skoog (MS) sólido con la adición de kinetina 0,1 mg/L, ácido 2,4 diclorofenoxiacético 5 mg/L, sacarosa 30 mg/L, agar 8 g/L; pH 5,8±1, en condiciones de oscuridad continua a 28±2 °C por 4 semanas. A través del arreglo trifactorial 23, fueron incrementados las concentraciones de C12H22O11 (de 30 a 40 g/L), NH4NO3 (de 1650 a 1655,6 mg/L), KH2PO4 (de 170 a 226,6 mg/L). Con el incremento conjunto de los tres componentes se logro obtener el mayor coeficiente de crecimiento (6.57) comparado con el medio testigo (3.96), el crecimiento fue evaluado por la variación en el peso húmedo. De acuerdo a la evaluación estadística de las variables, el incremento de KH2PO4 es el que ejerce mayor influencia sobre la formación de biomasa. Adicionalmente fue evaluado el comportamiento cinético de células de G. longiflora en medio líquido MS en el que el valor de coeficiente de crecimiento máximo alcanzó el valor de 1.52 muy por debajo del obtenido en los callos. En las condiciones de cultivo en medio sólido las actividades de las enzimas oxidasa y peroxidasa fueron determinadas con el cromógeno ABTS (2,2" azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-sulfonato)). La oxidasa presenta mayor actividad en la tercera semana de cultivo; mientras que, la actividad peroxidasa es mayor a la primera semana de cultivo, con la tendencia posterior a la disminución, la actividad enzimática fue independiente de la variación de nutrientes ensayada. Sin embargo, la actividad oxidasa y peroxidasa son dependiente de la etapa de crecimiento en la que se encuentran los callos. El material seco y molido de callos de G. longiflora, fue extraído con diclorometano, para luego ser separados en cromatografía en columna abierta utilizando como eluyente mezclas de: éter de petróleo, diclorometano y metanol. En cromatografía en capa fina se observaron bandas con Rf´s similares a: 2-fenilquinolina, 2-(3,4-metilendioxi)-feniletil-quinolina, 2-n-pentilquinolina, 4-metoxi-2-fenilquinolina, 2-(3,4 dimetoxi) feniletilquinolina. La banda con mayor intensidad, presente en todas las extracciones, fue analizada por Resonancia Magnética Nuclear y Espectrometría de Masas, confirmándose la producción de 2-fenilquinolina, durante el cultivo. Cabe mencionar que esta sustancia es el componente mayoritario de los alcaloides producidos en las hojas de G. longiflora en su hábitat. Las células cultivadas, in vitro, de G. longiflora mantienen la capacidad de sintetizar alcaloides quinolinicos, y de acuerdo a las características de crecimiento obtenidos, estos otorgan perspectivas para la obtención continua de alcaloides quinolinicos leishmanicidas haciendo uso de las herramientas de la biotecnología vegetal, para su posible aplicación en el tratamiento de las distintas Leishmaniasis.