Evaluación de la efectividad de Page Lock Gel en la extracción de ADN de Leishmania por el método fenol-cloroformo para el diagnóstico por la PCR.

Abstract

INTRODUCCIÓN.- En Bolivia, actualmente la enfermedad de la leishmaniasis, tiene presencia en los nueve departamentos, presentando una tasa de prevalencia de 32,7/cada 100.000 Hab. en el 2006, constituyéndose así en un problema de salud pública que requiere una urgente atención, principalmente mejorando los métodos de diagnostico. JUSTIFICACION.- La PCR ha presentado una sensibilidad y especificidad próximas al 100 por ciento, en el diagnostico de enfermedades infecciosas, sin embargo su reproducibilidad se ha visto afectada por el método de extracción de ADN empleado, pues existen diversos métodos de extracción con rendimientos variables; por esta razón la industria va creando nuevos productos con el fin de permitir mejorar el rendimiento de estos métodos de extracción, tal el caso de Page Lock Gel (PLG), que ofrece mejorar el método de extracción de ADN por fenol-cloroformo, un método de bajo costo, aplicable a distintos tipos de muestras con un alto rendimiento. Lo que plantea la necesidad de EVALUAR EXPERIMENTALMENTE éste producto para su empleo en el Diagnóstico de Leishmaniasis. OBJETIVO.- Evaluar la efectividad de PAGE LOCK GEL en la extracción de ADN de Leishmania por el método fenol cloroformo para el diagnóstico por la PCR. METODOLOGÍA.- La metodología adoptada fue, el Estudio experimental comparativo. Se estudio un total de 29 pacientes con diagnostico presuntivo de Leishmaniasis, atendidos por el Proyecto de Salud Río Beni de Rurrenabaque, durante el último trimestre del 2006. Se tomo muestras de sangre (29) y de lesiones (21), cuando las lesiones estaban activas. Se extrajo ADN por el método fenol-cloroformo con y sin PLG, de cada una de las muestras, luego se evaluó las diferencias obtenidas por electroforesis en geles de agarosa y espectrofotometría UV a 260 y 280 nm; y se realizó PCR con los ADN extraídos por fenol-cloroformo con PLG, con controles de inhibición, para el diagnóstico de Leishmaniasis. RESULTADOS.-La aplicación de PLG durante la extracción de ADN produjo, tanto en muestras de sangre como de lesión produjo mejoras en ADN extraído, en la concentración de ADN hubo un incremento del 10 a 40 por ciento y hubo un aumento de las muestras con alto índice de pureza en un 31 a 33 por ciento más que las obtenidas sin el empleo de PLG. No se evidencio la presencia de inhibidores para la PCR en los ADN extraídos con PLG. CONCLUSIÓN.- PLG incrementa el rendimiento, en cuanto a la concentración y pureza, del método de extracción de ADN Fenol-Cloroformo, sin conferirle ningún inhibidor para la PCR, proporcionando así un material idóneo para la realización de la PCR aplicable al diagnóstico de Leishmaniasis.