Identificacion de anticuerpos contra islote de pancreas (ICA's) en pacientes diabeticos tipo 1 y en sus familiares mediante inmunofluorescencia indirecta, comparando entre un sustrato cacero y otro comercial (kit comercial), en el periodo 2003-2004 en el Instituto SELADIS

Abstract

El presente trabajo se realizó con el fin de optar a la prevención antes que el tratamiento de Diabetes Mellitus (DM) y constituye un estudio previo para contribuir y complementar investigaciones anterioresrealizadas en el Instituto SELADIS. Nos propusimos identificar Anticuerpos ContraIslote de Páncreas (ICA’s) en pacientes diabéticos tipo 1 y en sus familiares mediante Inmunofluorescencia Indirecta (IFI), comparando entre un sustrato preparado en el laboratorio y otro preparado comercialmente (Kit comercial). Para esto, realizamos la detección de anticuerpos antinucleares (ANA) para evitar que estos actúen como interferentes, estandarizando la técnica de adsorción de sueros que presentaron ANA+ mediante la previa obtención de núcleos purificados en solución. Además preparamos cortes a congelación en tejido glandular de páncreas de rata para utilizarlo como sustrato “cacero” para la detección de ICA’s mediante IFI y determinar la glicemia basal y la detección de ICA’s mediante IFI utilizando ambos sustratos y correlacionar los resultados con la evaluación física de los pacientes. Finalmente se logró identificar ICA’s en pacientes con Diabetes Mellitus y en sus familiares de 1er. y 2do. grado, mediante IFI, comparando entre un sustrato preparado en el laboratorio y otro preparado comercialmente, técnica útil como “Prueba de Tamizaje”. Se determinó el título de ANA’s en todas las muestras, ya que todas mostraron un título mínimo de 1/40. Mediante nuestra técnica estandarizada de obtención de núcleos purificados en suspensión, se obtienen 10 mL de núcleos en suspensión en una concentración de 3 x 10 6 núcleos/mL, por cada 10 a 15 g de tejido empleado. Se estandarizó la técnica de adsorción de sueros que presenten anticuerpos antinucleares positivos (ANA+) mediante los núcleos purificados en solución. Se obtuvieron buenos cortes a congelación en tejido glandular de páncreas de rata para utilizarlo como sustrato “cacero” para la detección de ICA’s mediante IFI. La glicemia basal en los pacientes con Diabetes Mellitus tipo 1 y en sus familiares. La evaluación física para la identificación de factores de riesgo, estuvieron en relación con la presencia de ICA’s tanto en pacientes como en sus familiares genéticamente predispuestos. Los valores de glucosa basal tiene un valor determinante en el presente trabajo, ya que sirve como indicador del metabolismo de los hidratos de Carbono. Ladetección de ANA’s fue imprescindible e importante debido a que éstos mostraron ser interferentes para la técnica de IFI en la detección de ICA’s, por lo tanto es necesaria una adsorción previa, siendo una muy buena alternativa la técnica estandarizada y desarrollada en el presente trabajo. En cuanto las ventajas y desventajas de la utilización del páncreas de rata y de mono como sustrato, una desventaja innegable de la utilización de páncreas de rata, recae sobre el tiempo que toma la técnica completa, siendo que para la técnica del kit comercial se nos facilitó toda ésta etapa previa. Se consideran sujetos ICA+ a familiares de 1er. grado de diabéticos cuando en dos ocasiones consecutivas dos sueros distintos de la misma persona los ICA´s persisten, por lo tanto, los resultados de IFI en páncreas de mono del presente trabajo no son, definitivos. La importancia clínica en detectar uno o más auto anticuerpos característicos de la DM1, permite identficar con mayor probabilidad a personas con riesgo para DM1, dando opción al paciente de adoptar medidas preventivas.