Establecimiento del diagnóstico molecular de la hepatitis C a través de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa de transcripción reversa y monitoreo mediante el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas.

Abstract

La Hepatitis debida a virus se ha convertido en uno de los principales problemas emergentes de salud. De los virus hepatótropos, el Virus de la Hepatitis C (VHC) realza importancia ya que produce cronicidad en aproximadamente el 85 por ciento de los casos. Más de un millón de casos son registrados anualmente a nivel mundial y se estima que la infección por este virus es más prevalente que la infección por el Virus de la Hepatitis B, más aún debido a que no existe una vacuna ni un tratamiento exitoso que erradique eficazmente la infección. Una vez que una persona contrae la infección por el VHC, en la mayoría de los casos durará toda la vida. Los métodos de diagnóstico no siempre pueden ser aplicados por deficiencias inherentes a los mismos. Ventajas como la alta sensibilidad y especificidad en ensayos moleculares hacen que los costos sean elevados; los métodos serológicos son más accesibles pero presentan una gran problemática, resultados Falso negativos. El presente estudio tiene como objetivo establecer el diagnóstico molecular de la Hepatitis C a través del RT-PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa de Transcripción Reversa) mediante monitorización a través del EIA (Ensayo Inmunoabsorbente Ligado a Enzimas). En 56 muestras de sueros reactivos Anti-VHC procedentes de Centros de salud de la Ciudad de La Paz, entre Febrero del 2006 a Junio del 2007 evaluados por RT-PCR y ensayos EIA de tercera (3.0) y Cuarta (4.0) Generación, se encontró un 32,14 por ciento de amplificación (RT-PCR positivos), y un mayor grado de reactividad en el EIA 4.0 (73,21 por ciento) en comparación al 3.0 (28,3 por ciento), no obstante el grado de concordancia para ambos EIA's es Insignificante [K= 0,07; IC 95 por ciento (0.0031,0.1387)]; por otro lado, cuando muestras RT-PCR positivas se compararon con los EIA's, existió mayor concordancia del RT-PCR con el EIA 4.0 (66,7 por ciento) que con el 3.0 (37,5 por ciento) (verdadero-positivos). En ensayos Inmunoenzimáticos, la posibilidad de reacción cruzada (Especificidad analítica) fue descartada ya que no se encontraron resultados Falso positivos; el límite de detección en una serie de diluciones (Sensibilidad analítica) usando un control positivo Anti-VHC UKAS-NIBSC, mostro resultados difícilmente correlacionables y comparables a muestras, debido a la carencia de un "Gold Estandar" que cuantifique el título de anticuerpos. Finalmente, de los tres métodos de extracción de RNA para RT-PCR desarrollados, el Protocolo Fenol/Cloroformo es el más efectivo (60 por ciento RT-PCR positivos), alternativamente pueden usarse los métodos de extracción Powder Glass y Trizol LS. De acuerdo a estos resultados, se estableció el Diagnóstico molecular del VHC a través del RT-PCR debido a su alta especificidad para identificar secuencias genómicas específicas, conservadas y por lo tanto presente en todos los genotipos virales, sin embargo se sugiere que el diagnóstico debe ser previamente monitorizado mediante la implementación de los ensayos EIA 4.0 en los laboratorios de rutina. Consideramos que muestras con Índice de Reactividad Serológica (ISR) ?1,0 en EIA 4.0 muestran una mejor correlación y deberán someterse a confirmación por RT-PCR. Esta misma aseveración es dudosa en EIA 3.0.