Evaluación de marcadores genéticos para la detección de leishmania braziliensis por la reacción en cadena de la polimerasa.
Resumen
En el presente trabajo, se realizaron ensayos de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) para la detección de Leishmania braziliensis en muestras de sangre periférica, en los que se optimizaron las condiciones de reacción y se evaluó la sensibilidad analítica de marcadores genéticos kinetoplastidiales ampliamente utilizados como el 13 A y 13 B, así también de otros marcadores con sitios blanco dirigidos a rRNA SSU o ADN ribosomal como R 221, R 332 y la región de la ?- Tubulina como ser TUB 1 y TUB 6. En este estudio se usó como método de extracción, el kit comercial Wizard Genomic de la línea PROMEGA, que permitió obtener ADN de Leishmania apto para la amplificación a partir de muestras de sangre inoculadas in vitro con cultivos de promastigotes de Leishmania braziliensis, este método de extracción fue œtil, pero está sujeto a varios cuestionamientos sobre la concentración y pureza obtenidas, que deben ser respondidos en posteriores estudios. Se pudo evidenciar la existencia de variaciones en la sensibilidad analítica de los marcadores moleculares como los kinetoplastidiales 13 A y 13 B que dieron un límite de detección de 100 parásitos por mL de muestra, el marcador de ADN ribosomal con un límite de detección de de 10 4 parásitos por mL, ambos marcadores con limites de detección menores a los reportados por otros autores.
Los marcadores de la ?-tubulina (TUB 1 y TUB 6) dieron una mayor sensibilidad analítica hasta 1 parasito por mL. En una reacción multiplex en forma conjunta con los marcadores A2 y A10 que reconocen la región de la ?-tubulina específica para la identificación del subgénero Viannia, alcanzaron un límite de detección de hasta 10 parásitos por mL de muestra. Los marcadores dirigidos a la ?- Tubulina fueron considerados en este estudio, con la mejor capacidad de detección y se recomienda continuar con las etapas de validación permitirán contribuir con la información necesaria para su uso en el diagnostico preciso de la leishmaniosis mucocutánea.