Estandarizacion de métodos espectrofotometricos para la determinacion de malondialdehido y carboxihemoglobina en estrés oxidativo

Abstract

Los productos metabólicos de la respiración celular normal generan radicales libres, su exceso, produce estrés oxidativo, consecuentemente lesión de células y tejidos. Establecer la presencia de estrés oxidativo, coadyuva al diagnóstico clínico, prevención y pronostico, de muchas enfermedades. La determinación del Malondialdehido (MDA), con la técnica de ASKAWA Y MATSUSHITA y OKAWA, es el método más utilizado para la cuantificación de Estrés Oxidativo y se basa en la reacción del MDA con el ácido 2-tiobarbitúrico (TBA). Dicho método fue la base para la estandarización de la técnica adecuándola a nuestro medio, analizando todas las condiciones de reacción, realizando modificaciones principalmente en el tiempo de reacción y cambio de algunos reactivos, nocivos al medio ambiente y de riesgo para la salud del personal de laboratorio. El otro método estandarizado, fue la determinación de carboxihemoglobina (COHb), que determina el nivel de monóxido de carbono en sangre, considerado también un marcador biológico de estrés oxidativo. La técnica desarrollada se fundamenta en la reacción de Ditionito de Sodio como agente reductor en sangre total, por espectrofotometría. Los resultados obtenidos en la estandarización de ambas técnicas mostraron una precisión, reproducibilidad y repetibilidad, revelada a través un Coeficiente de Variación (CV) < a 5%. Mediante la curva ROC se determinó que el método para cuantificar MDA es más sensible que específico, pudiéndose aplicar para la determinación de Estrés oxidativo, en estudios de tamizaje, además se pudo establecer el punto de corte de 5,3 µm/l. La técnica para medir la saturación de carboxihemoglobina permite realizar una medición rápida en sangre venosa que no tiene diferencia significativa con la medición de COHb en sangre arterial.