Optimización del uso de la técnica de western blot como herramienta inmunoproteómica, para la identificación de proteínas antigénicas con fines de diagnóstico de cisticercosis

Abstract

La cisticercosis es una enfermedad zoonótica desatendida, causada por Taenia solium y transmitida por la ingestión de los huevos del parásito, causando daño al tejido muscular (cisticercosis) y posteriormente al cerebro (neurocisticercosis). (Chile, 2020) El método que se emplea para el diagnóstico de la cisticercosis es el ELISA (Ensayo Inmunoadsorbente unido a enzima), el cual tiene sensibilidad relativamente baja, por lo que el diagnóstico del paciente debe ser confirmado por Western blot o por las pruebas imagenológicas, tomografía axial computarizada y resonancia magnética nuclear. (Oswgladys & Ferrer, 2016). Según la OPS/OMS (2018) la prueba serológica comercial no presenta una especificidad y sensibilidad suficiente para el diagnóstico de cisticercosis debido a la reacción cruzada que presenta con otros parásitos. La situación actual de Bolivia con respecto a la cisticercosis no está actualizada, sin embargo, es necesario tener en cuenta que la mayor parte de la población no tiene servicios básicos y es uno de los factores causantes de la cisticercosis. Otras causas que podemos mencionar son: falta de control en la crianza de porcinos, la presencia de mataderos clandestinos y la venta de carne de cerdo de dudosa procedencia. El objetivo del presente estudio es optimizar el uso de la técnica de Western blot, para el estudio de proteínas antigénicas nativas. Para el presente trabajo se obtuvo un cerdo infectado con cisticercos de Taenia solium, que fue faenado. Procedente de la región de Batallas, ubicada en la Provincia Los Andes del departamento de La Paz. La obtención de la muestra y la parte experimental se realizó en el Instituto SELADIS, en un ambiente adecuado para evitar la contaminación de las muestras. Posteriormente, se efectuó la cuantificación de proteínas por el método de Bradford, para conocer la concentración de las mismas. Luego se emplearon métodos para solubilizar, disgregar, desnaturalizar y reducir las proteínas, con la finalidad de obtener las proteínas antigénicas por sus puntos isoeléctricos por electroforesis bidimensional y sus pesos moleculares a través de la electroforesis vertical. Dichas proteínas antigénicas, presentes en el gel, se transfirieron al equipo de Western blot, en una membrana de nitrocelulosa y finalmente se conjugaron con los anticuerpos de pacientes positivos a cisticercosis diagnosticados por ELISA. Entre los resultados obtenidos, se encontró que el líquido vesicular presentó 30 proteínas, de las cuales 5 fueron seleccionadas por presentar reactividad con los sueros positivos para cisticercosis.