Detección de la expresión del gen interferón gamma mediante RT-PCR en células murinas tratadas con Galipea longiflora (evanta).

Abstract

El presente trabajo caracterizó la expresión del gen Interferon Gamma (IFNg) en cultivo in vitro de células murinas sometidas al extracto de alcaloides totales (EAE) de Galipea longiflora (evanta), al estimulante Concanavalina A (ConA), al antígeno (Ag) del parásito Leishmania sp. y a combinaciones de estos. El extracto de evanta se ha utilizado experimentalmente como antiparasitario para combatir los efectos de la leishmaniosis cutánea en el marco del proyecto ASDI/UMSA Enfermedades Infecciosas del trópico boliviano. Para obtener datos semi-cuantitativos de la expresión del IFNg, que forma parte de la respuesta inmune en los murinos, se utilizaron tres sistemas semi-automatizados: 1) Maxwell 16 para la extracción de ARN total, 2) PolyAT-tract para purificar el ARN mensajero, y 3) Access RT-PCR para la retro-transcripción y obtención de ADN copia (ADNc) a partir del ARNm purificado del gen IFNg y del gen de expresión constante B2-microglobulina como patrón de normalización proporcional. La normalización se empleó para ajustar los valores semi-cuantitativos de ADNc a una escala común de comparación. Los resultados obtenidos mostraron que las variables ensayadas son estimulantes en todos los casos, siendo la combinación de EAE+Ag cuatro veces más potente que la ConA (estimulante control) y tres veces más que el antígeno solo o que la combinación ConA+EAE, lo que demuestra que la presencia del parásito Leishmania sp. en combinación con los alcaloides totales de evanta estimula la expresión del gen IFNg del sistema inmune murino. Asimismo se desarrollaron cebadores específicos y una sonda para PCR en tiempo real con proyección a realizar una cuantificación absoluta del fenómeno estudiado.