Validacion de la genotipificación como prueba para el diagnóstico y determinación de resistencia a rifampicina e isoniacida en cepas de micobacterium tuberculosis circulantes en Bolivia.

Abstract

El resurgimiento de la tuberculosis con características epidemiológicas y la aparición de cepas múltidrogo-resistentes, hace imperativo el diseño de estrategias de diagnóstico y estudios de susceptibilidad a drogas que permita obtener resultados inmediatos. Sin duda, el conocimiento de las bases moleculares de los mecanismos de resistencia a antibióticos provee información de gran valor para el manejo del paciente. El análisis genético de los microorganismos podría acortar el periodo de reporte de la resistencia a drogas, particularmente a drogas de primera línea, con la finalidad de adoptar un esquema terapéutico acertado, oportuno y así, lograr la cura del paciente, lo que se traduce en una disminución en la transmisión del patógeno y de la propagación de cepas multidrogo-resistentes. Adicionalmente la caracterización molecular del mecanismo de resistencia brinda información sobre el potencial de virulencia de una cepa particular. En este estudio se procedió a extraer el material genético a partir de colonias resuspendidas en agua, mediante ebullición y por combinación de métodos físicos y químicos, con posterior visualización del mismo mediante electroforesis, luego, se amplificaron genes específicos del ADN extraído mediante Reaccion en Cadena de la Polimerasa (PCR) multiplex, de igual manera los amplicones se visualizaron por electroforesis, para su posterior hibridación y análisis de los resultados obtenidos. Se tipificaron, 138 cepas de M. tuberculosis, los resultados se compararon, con los perfiles de susceptibilidad obtenidos por el método de las proporciones (canetti Rist) obtenidos en INLASA. La concordancia fue: fenotipo MDR 52/genotipo MDR 36 (71por ciento); Monoresistentes a Rifampicina fenotipo 14/genotipo10 (71por ciento), monoresistentes a Isoniacida fenotipo 31/genotipo 19 (61por ciento), y cepas sensibles fenotipo 40/genotipo38 (95por ciento). La sensibilidad del método para detectar cepas MDR es de 72por ciento especificidad de 94por ciento y valores predictivos positivo y negativo de 88 y 79por ciento respectivamente. Para cepas resistentes a Rifampicina la sensibilidad es de 80por ciento especificidad de 94por ciento y valores predictivos positivo y negativo de 93 y 84por ciento respectivamente. Para cepas resistentes a Isoniacida la sensibilidad es de 69por ciento especificidad de 89por ciento y valores predictivos positivo y negativo de 91 y 67por ciento respectivamente. La genotipificación permite analizar de forma específica las mutaciones que con mayor frecuencia desencadenan en resistencia a Isoniacida y Rifampicina, el cual comparado con el método convencional fenotípico (DST), presenta una sensibilidad y especificidad elevada para la detección del complejo M. tuberculosis y los genes que confieren resistencia a Isoniacida y Rifampicina. Se demostró, que este método es suficientemente sensible y específico, así mismo los valores predictivos muestran datos que nos prueban que el método es válido, confiable y aplicable para ser incorporado como prueba de rutina en apoyo al diagnóstico y determinación de susceptibilidad a antituberculosos emitido por el Laboratorio de Referencia Nacional de Tuberculosis (INLASA).