Validación de la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (qpcr) acoplada a curvas melting como herramienta alternativa para el diagnóstico de tuberculosis multidrogorresistente

Abstract

La tuberculosis es una enfermedad infecto-contagiosa, causada por diversas especies del Complejo Mycobacterium tuberculosis, actualmente se estima que un tercio de la población mundial se encuentra afectada por lo que representa una amenaza para la salud pública, principalmente por el surgimiento de cepas Multidrogorresistentes (TB-MDR). En Bolivia en la gestión 2017, en Bolivia se reportaron 7.538 personas enfermas con Tuberculosis, y los últimos datos sobre TB-MDR indican un aumento de 0,2% por año, el año 2012 se registró un 3,1% de TB-MDR. Actualidad en nuestro país se emplean métodos moleculares para la identificación de este agente infeccioso; no obstante, existen muy pocos o ningún trabajo acerca de la aplicación de métodos moleculares para la detección precisa y efectiva de cepas TB-MDR que otorguen validez a los resultados emitidos. Este trabajo resuelve el cuestionamiento de si la PCR en tiempo real (RT-qPCR) acoplada a curvas melting es una herramienta de diagnóstico alternativo aplicable y confiable, para la identificación de tuberculosis multidrogorresistente. Se trabajó con 74 cepas de Mycobaterium tuberculosis fenotípicamente identificadas por cultivo (método de las proporciones, Canetti Rist). El material genético se obtuvo por columnas, por ser el que mejores resultados presentó en el desarrollo de la PCR. Se utilizaron dos controles primarios del método para la determinación de resistencia a Isoniacida y Rifampicina, tanto los controles como las muestras se procesaron por RT-qPCR acoplada a curvas melting, mediante cambios de temperatura de disociación. Los resultados de la validación reflejaron: sensibilidad: 67.4%, especificidad: 83.3%, exactitud: 73.97%, VPP: 85.3%, VPN: 64.1%, LR(+): 4.18 y LR(-): 0.38 para Isoniacida, mientras que para Rifampicina: Sensibilidad: 97%, especificidad: 20%, exactitud: 58.9%, VPP: 55.4%, VPN: 87.5%, LR(+): 1,21 y LR(-): 0.10. El método evaluado para la determinación de resistencia a Isoniacida presenta un equilibrio bueno entre sensibilidad y especificidad, por lo que representa una alternativa diagnóstica confiable, mientras que el método evaluado para resistencia a Rifampicina presenta una alta sensibilidad que es muy útil para países endémicos como es Bolivia.