Validación de la técnica reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para cuantificación del promotor CAMV P-35S y del terminador T-NOS en granos de soya

Abstract

La producción de alimentos transgénicos se está incrementando a través de los años en el mundo entero, por consiguiente, las legislaciones y regulaciones de producción, venta, y consumo también deben ser aplicadas con mayor rigurosidad. Se validó la técnica reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para la cuantificación de elementos específicos reguladores en los organismos genéticamente modificados presentes en la soya genéticamente modificada, que es utilizada en una diversidad de alimentos. Se utilizó un molino criogénico para la pulverización de los granos de soya, el método de CTAB para la extracción y purificación del ADN, siendo este luego cuantificado por un método fluorométrico, para después cuantificar las secuencias de ADN promotor CaMVP-35S y terminador T-NOS mediante la técnica de PCR en tiempo real. La especificidad, linealidad, eficiencia de amplificación, coeficiente de determinación, veracidad, precisión en condiciones de repetibilidad, precisión intermedia, límite de cuantificación y detección fueron evaluados con criterios recomendados por La Red Europea de Laboratorios OGM, y la incertidumbre fue calculada. La técnica de PCR en tiempo real empleando tecnología TaqMan fue específica para las secuencias diana, la cuantificación fue precisa y veraz en el rango de 0,1% a 5%, la eficiencia de amplificación media tuvo un valor de E=90,6% para el promotor CaMVP-35S, E=91,5% para el terminador T-NOS y E=91,3% para el gen de la lectina de soya, el límite de cuantificación y detección 0,12% y 0,03% respectivamente. Finalmente, la declaración del método validado confirmo que los parámetros evaluados cumplen los criterios de aceptación para la ampliación prevista.