Optimizacion del metodo mtt para proliferación celular, frente a antigenos de leishmania in vitro, en pacientes con leishmaniasis cutanea y mucocutanea.

Abstract

La Leishmania braziliensis es un protozoario parasítico causante de la forma más común de Leishmaniasis tegumentaria, denominada Leishmaniasis cutánea. Una fracción de pacientes con Leishmaniasis cutánea desarrolla la enfermedad mucosa o Leishmaniasis cutánea mucosa, en esta forma clínica se caracteriza por una respuesta inmune celular exacerbada, sin embargo los mecanismos asociados a la patología no han sido totalmente esclarecidos.Para mejorar la comprensión de estos mecanismos, se utilizó un sistema in vitro en el cual se extrajeron las células mononucleares periféricas de pacientes con leishmaniasis cutánea y cutánea mucosa internados en el área de Dermatología del Hospital de Clínicas, los linfocitos fueron cultivadas en presencia de antígenos de promastigotes de Leishmania braziliensis. El objetivo general del presente estudio fué evaluar la utilidad de los antígenos de Leishmania sobre las células mononucleares del sistema inmune de pacientes con diagnóstico de Leishmaniasis, para ello empleamos cultivo celular de Leishmania braziliensis y obtuvimos el extracto crudo (antígenos) a través de 2 métodos: congelación/descongelación y sonicación. Se llevaron a cabo experimentos para evaluar la proliferación in vitro de linfocitos de 10 pacientes con diagnóstico de Leishmaniasis cutánea y cutánea mucosa, con un régimen de tratamiento al momento de la toma de muestra de sangre, los ensayos se realizaron frente a Concanavalina A (Con A) y antígenos totales de Leishmania braziliensis obtenidos por técnicas de congelación/descongelación y por sonicación, usando el bioensayo de MTT. En los tres primeros pacientes con LC y LCM, cuyo tiempo de evolución de la infección fué mas de un año, la respuesta de proliferación de linfocitos extraídos, en respuesta a Con A y los antígenos de Leishmania, fue baja en comparación con la respuesta obtenida con los pacientes 4,5,6,8,9,10 que fue más alta, todos los pacientes mostraron una respuesta mayor de proliferación con el antígeno obtenido por congelación/descongelación y solo el paciente N°7 con diagnóstico de leishmaniasis cutánea mucosa y con dos años de evolución de la infección, mostró una respuesta linfoproliferativa más intensa al antígeno obtenido por sonicación. Por lo tanto lo resultados del presente estudio sugieren una respuesta celular específica de los pacientes, cuya manifestación de la respuesta inmune es la proliferación celular, sugiriendo la acción del estado inmunológico del hospedero y el tiempo de tratamiento de la enfermedad.