Optimización del ensayo reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real “qPCR” para la cuantificación de staphylococcus aureus en queso fresco.

Abstract

La inocuidad de los alimentos es una cuestión fundamental de salud pública. Staphylococcus aureus (S. aureus) es reconocido en todo el mundo como un importante patógeno de origen alimentario, la cuantificación de rutina de S. aureus en alimentos se suele llevar a cabo aplicando el método de cultivo tradicional. En los últimos años, se han propuesto varios métodos moleculares basados en la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) para la detección y cuantificación de microorganismos en alimentos, los cuales a diferencia de las técnicas clásicas, se caracterizan por ser procedimientos más cortos y menos laboriosos. El objetivo del presente trabajo fue el optimizar un método qPCR para la cuantificación de S. aureus en muestras de queso fresco, mismo que se realizó en tres fases; en la primera se verificó el método de cultivo tradicional, aplicado en el Laboratorio de Microbiología de Alimentos del SELADIS basado en la Norma Boliviana NB32004. En la segunda fase se optimizó el método qPCR, utilizando el marcador de fluorescencia SYBR Green. Se establecieron las condiciones de reacción y aplicaron primers específicos dirigidos al gen Nuc, obteniéndose un método rápido que presenta resultados en un solo día, además de constituir una técnica específica y sensible (desde 10 UFC/g). Con el método qPCR optimizado y el método de cultivo tradicional verificado, se continuó con la tercera fase, en la cual se analizaron por ambos métodos 17 muestras de queso fresco llegando a cuantificarse S. aureus en un 94% de las muestras analizadas. Comparando los resultados obtenidos por medio del análisis T de Student, se concluyó que ambos métodos, qPCR optimizado y el método de cultivo tradicional no presentan diferencias estadísticas significativas, por lo cual, se puede asumir que estos se pueden utilizar indistintamente para el análisis de recuento de S. aureus.